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采用经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100～150kb以上的基因组DNA，提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为：从1g组织可以提取到约150～200μg 100kb以上的基因组DNA，从10⁶～10⁷Hela细胞可以提取到约5～50μg 100kb以上的基因组DNA。

• 组织或培养细胞
  
• PBS、无水乙醇、70%乙醇、酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)
  
• 离心机、研钵、剪刀、恒温箱、EP管

• 如果打算提取大片段的基因组DNA，应尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组DNA的样品。
  
• 准备细胞样品时，如果细胞量过少(＜3×10⁷)，应0.3mL含蛋白酶K的样品裂解液。
  
• 为避免高分子质量DNA被剪切，可以不采用乙醇沉淀DNA，可用透析袋替代乙醇：在100倍体积的TE Buffer中至少透析2次，所用取全部时间应＞24h。
  
• 不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 准备样品：
  ①组织样本：切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结，将100mg冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末；
  ②培养细胞：收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液，贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用PBS清洗1次。
  4℃ 1500rpm离心1～2min，弃上清，用1～2mL预冷的PBS再次悬浮离心，如此2洗涤次。
  
• 每1mL样品裂解液加入5μL的蛋白酶K溶液，混匀。每50mg组织或5×10⁷细胞用0.45～0.55mL样品裂解液悬浮，悬浮应彻底，不应留下结块。
  
• 充分混匀，50℃振荡下温育12～18h或过夜。
  
• 加入等体积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)，轻轻混合，尽可能减少对DNA的剪切。
  
• 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积酚/氯仿/异戊醇再抽提1次；重复该步骤1次。
  
• 吸取上层液(水溶液)250～300μL至新EP管中，加入等体积无水乙醇和1/4体积的乙酸铵溶液，颠倒混匀数次。4℃ 10000rpm离心1min，弃上清。
  
• 向沉淀中加入70%乙醇，4℃ 10000rpm离心1min，弃上清。重复该步骤一次。
  
• 尽量吸除残余的乙醇，空气干燥，等到不到明显液体时，立即加入50～100μL Nuclease-Free Water溶解DNA，4℃或-20℃保存。
  
  • 不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解；如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。
• A₂₆₀/A₂₈₀处检测DNA纯度，高纯度的DNA一般A₂₆₀/A₂₈₀＞1.8。